Page 391 - FRUTAS DEL TRÓPICO

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biotecnología de fRutas tRopicales

Aguacate persea americana Mill.
Embriogénesis somática (Witjaksono & Litz, 1998a, b)

Obtención de Explantes e inducción. Como explantes se utilizaron bien nucelas de frutos inma-

duros o bien embriones cigóticos inmaduros. El medio de inducción consiste en los macronu-

trientes del medio B5 (Gamborg et al., 1968), los micronutrientes del MS (Murashige & Skoog,

1962) y suplementado con picloram 0.41 µM y (en mg l-1) tiamina HCl (0.4), myo-inositol
(100), sacarosa (30 000) y agar 8 g l-1. El medio de cultivo debe repartirse en alícuotas de 10

ml en cajas de petri estériles desechables (60 x 15 mm), las cajas son selladas con Parafilm®.

Los cultivos en medio semisólido son mantenidos en oscuridad a 25°C.

Mantenimiento. Los cultivos embriogénicos consisten de masas proembriónicas (PEMs),

que pueden ser mantenidas en 80 ml de medio esterilizado por filtración en matraces Erlen-

meyer de 250 ml, a 120 rpm, en penumbra por 14 días. La cantidad de inóculo es aprox. 300-

400 mg/80 ml medio en matraces Erlenmeyer de 250 ml. El cultivo es pasado por un colador

doméstico o por una malla de nylon. La fracción que pasa por el colador es cultivada en medio

liquido para embriogénesis (LEM, liquid embryogenesis medium). Si se desea, la fracción grue-
sa puede ser re-cultivada en medio de 2,4-D. Mantener los cultivos en oscuridad a 25°C.

Maduración/germinación. Embriones somáticos globulares/PEMs (≥1.5 mm diam) se de-

sarrollaron después de 1-2 meses a partir de cultivos embriogénicos en medio MS sin piclo-

ram y suplementado con agar para cultivo de tejidos (TC agar) 6.0 g l-1 (Witjaksono, 1997).

Después de 1-2 meses, embriones somáticos opacos (≥0.8 cm diam) son transferidos indivi-

dualmente en medio MS semisólido suplementado con BA 4.44 µM y GA3 2.89 µM y subcul-

tivado a intervalos de 2 meses (Witjaksono, 1997). El medio de maduración es repartido en
alícuotas de 25 ml en tubos de ensaye de 25 x 150 ml que son sellados con tapas de plástico.

Los cultivos son mantenidos en oscuridad a 25 C hasta la germinación.
o

Universidad Autónoma de Chiapas