Page 404 - FRUTAS DEL TRÓPICO
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404 Frutas del trópico
Inducción. El medio de inducción consiste en los macronutrientes del B5 (Gamborg et al.,
1968), del MS (Murashige y Skoog, 1962) los micronutrientes y vitaminas, myo-inositol 100
mg l-1, glutamina 400 mg l-1, hidrolizado de caseína 200 mg l-1 y sacarosa 30 g l-1, y suple-
mentado con ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) 4.52 µM and kinetina 9.30 µM. El medio
fue solidificado con Gel-GroTM gellan gum 3 g l-1. Las citocininas fueron esterilizadas por
filtración y adicionadas al medio de cultivo que fue esterilizado en autoclave y vertido en cajas
de petri plásticas, estériles. Los explantes de folíolos son colocados en forma abaxial sobre el
medio de cultivo. Las cajas de petri fueron selladas con Parafilm®. Los cultivos son incubados
en oscuridad a 26±1°C.
Mantenimiento. Los cultivos embriogénicos consistentes en células y masas proembrio-
nales (PEM) son transferidas a medio semisólido MS con los macronutrientes al 50% y con los
micronutrientes y vitaminas del MS, myo-inositol 100 mg l-1, sacarosa 30 g l-1, 2,4-D 4.52
mM, zeatin 0.91 µM y Agargel (Sigma) 4 g l-1. Las cajas de Petri son selladas con Parafilm®
e incubadas en oscuridad a 26±1°C. Las masas proembrionales son subcultivadas a medio
fresco de la misma formulación a intervalos de 4 semanas.
Para iniciar cultivos embriogénicos en suspensión de ‘Brewster’, son inoculados 400 mg
de PEMs de 14 días, en 40 ml de medio de mantenimiento líquido, en matraces Erlenmeyer
de 125 ml. Los matraces son sellados con papel de aluminio y Parafilm®, y mantenidos en
una plataforma de agitación a 125 rpm bajo condiciones ambientales de laboratorio a 26±1 C
o
con subcultivos a intervalos de 2 semanas. En cada subcultivo, las suspensiones son pasadas a
través de una malla de filtración de nylon estéril (apertura de 1.6 mm), y un inóculo de ca. 400
mg de la fracción más gruesa (>1.6 mm) es adicionado a cada matraz Erlenmeyer de 125 ml
con 40 ml de medio fresco de mantenimiento.
Universidad Autónoma de Chiapas
